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IP专用纳米抗体


货号:GNA-20-400   GNA-25-500    GNA-50-1000

储存条件:可在4℃保存1年,或在-80℃长期保存,避免反复冻融。

 

产品描述

偶联anti-GFP纳米抗体的琼脂糖珠子用于免疫沉淀GFP融合蛋白。

产品优势

没有普通抗体的轻链和重链;

高亲和力:解离常数达到pM级别;

高载量:10μlslurry可以结合2-4μg GFP蛋白;

较短的孵育时间,结合5-30min即可;

应用范围

可用于免疫沉淀(IP/免疫共沉淀(CoIP)、染色质免疫沉淀(ChIP/RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)、酶活性测定、质谱分析等;

特异性

可以结合GFPEGFPYFPEYFP等。

产品特性

存储缓冲液:PBS(含有20%乙醇)

保存条件:可在4℃保存1年,或在-80℃长期保存,避免反复冻融。


实验步骤:

收集细胞:

每个免疫沉淀反应大约使用 10^6-10^7 个表达绿色荧光蛋白融合蛋白的细胞,可根据绿色荧光蛋白融合蛋白表达量适当调整细胞数。吸出培养基,向培养皿中加入预冷的PBS,漂洗2次,利用细胞刮或胰酶消化收集贴壁细胞,细胞转移到离心管,500g离心3分钟并丢弃上清液。

细胞裂解:

1.在裂解缓冲液中加入蛋白酶抑制剂,用500μl预冷的裂解缓冲液重悬细胞。

2.置于冰上30分钟,可每10分钟充分吹打一次。
3420,000g离心15分钟,将裂解产物(上清)转移到一个新的预冷管中,丢弃沉淀。注意:此时细胞裂解产物可长期保存于-80

平衡珠子:

4.振荡充分混匀GFP-Nanoab-Agarose, 吸取20μl该产品到500 μl预冷的裂解缓冲液中,42,500g离心2分钟,丢弃上清液。(此步骤可选)  

结合蛋白

5.将平衡好的GFP-Nanoab-Agarose加入到细胞裂解产物中(如果未做第4步,可在细胞裂解产物中直接加入20μl该产品),于4旋转混合结合5-30min。如果需要,留存50μl的裂解产物进行免疫印迹分析。
642,500g离心2分钟,丢弃上清液。如果需要,留存50μl上清液进行免疫印迹分析。

清洗珠子:

7.用500μl预冷的裂解缓冲液中重悬6GFP-Nanoab-Agarose42,500g条件下离心2分钟,丢弃上清液并重复洗涤2次。

洗脱蛋白:

方法一:
8.加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬GFP-Nanoab-Agarose
95,加热10min2,500g离心2分钟收集上清,收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。


 

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