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CelRed 核酸染料(10,000× 水溶液)

CelRed 核酸染料(10,000× 水溶液)

货号:CR001-500uL


储存条件  4℃避光可保存12个月。

CelRed核酸染料特点

无毒性:CelRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验果也表明,该染料的诱变性远远小于EB

    ● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I

稳定性高: 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其定,耐光性强。

    ● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。

操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗 ,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。

适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNAssDNA RNA 染色。

 EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可, 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。但是CelRed不能被488 nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。



CelRed使用方法简介

1.胶染法(用法同EB(推荐方法)

1) 制胶时加入CelRed 核酸染料(例如:50mL 琼脂糖溶液中加入5μL CelRed 10,000× 液,以此比例类推)。

2) 按照常规方法进行电泳。

注意事项:

此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做10050mL的胶。

由于CelRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将CelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶CelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色。

此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

2.泡染法

1)按照常规方法进行电泳。

2 H2OCelRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成染色液。(例如将15μL CelRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。

3 将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.510%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。

4)用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。

 

注意事项:

用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。

3× CelRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。

 

3核酸电泳的PAGE步骤:

 

1)将TBE制备的凝胶放入电泳槽中,用夹子夹住边缘。

2)用配置凝胶溶液同一批次的5×TBE灌满缓冲液槽。用注射器排除凝胶底部的气泡。

3)用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶上样缓冲液混合,用微量移液管加入加样孔。

4)将电极与电源相连(正极接下槽),打开电源一般90V18V/cm。进行电泳9h

5)电泳至标准参照染料迁移至所需位置(一般是电泳到二甲苯完全迁出,溴酚蓝距底边23cm停止)。关闭电源,拔掉插头,弃去电泳槽中的电泳液。

6)将凝胶取下来放入,染色皿中,加3XCelRed1X缓冲液中的振荡染色30-60分,放置在紫外检测即可。

 

注意事项

与琼酯糖凝胶不同,不能用预染或点染的方法;只能用泡染的方法显色,由于聚丙烯酰胺比较致密,染料不容易深入,显色效果没有琼酯糖凝胶好。

 

特别提醒:

如果您使用的是紫外成像仪,请选择CelRed;如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测,请选择CelGreen

在极少数情况下,质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低,此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适。


 

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